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目前主流的病毒載體系統(tǒng)主要包括慢病毒（LV）、（γ-）逆轉(zhuǎn)錄病毒（RV）、腺病毒（Ad）和腺相關(guān)病毒（AAV）。

慢病毒（LV）和γ- 逆轉(zhuǎn)錄病毒（RV）：均屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科。其RNA基因組能逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，穩(wěn)定整合至宿主細胞基因組中。逆轉(zhuǎn)錄病毒通常分兩種：γ- 逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)構(gòu)單一，慢病毒存在一些附屬基因和調(diào)控基因，。

腺病毒（ADV）：是一種復(fù)制缺陷型病毒，通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用進入細胞，借助特定細胞系（HEK293）復(fù)制和增殖，不整合到宿主細胞基因組中。

腺相關(guān)病毒（AAV）：屬微小病毒科，為無包膜的單鏈線狀 DNA 病毒。只有在腺病毒或者皰疹病毒等輔助病毒協(xié)助下，宿主才能產(chǎn)生具有感染性的AAV，所以 AAV 被稱作腺相關(guān)病毒。

慢病毒載體（ Lentiviral vector, LVs ）是在 HIV-1 病毒基礎(chǔ)上改造而成的病毒載體系統(tǒng)，它能高效的將目的基因（或 RNAi ）導(dǎo)入動物和人的原代細胞或細胞系。慢病毒載體基因組是正鏈 RNA ，其基因組進入細胞質(zhì)后，被自身攜帶的反轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄為DNA ，再進入到細胞核并整合到細胞基因組中。整合后的 DNA 轉(zhuǎn)錄 mRNA ，回到細胞質(zhì)中，表達目的蛋白；或產(chǎn)生 RNAi 干擾。

慢病毒的優(yōu)勢

①      慢病毒能夠感染多種難以感染的細胞，如原代細胞、干細胞、非分裂細胞（神經(jīng)元細胞）等。

②      慢病毒能將外源基因整合到細胞基因組中，穩(wěn)定表達外源基因。

③      慢病毒感染篩選穩(wěn)定細胞株所需時間較短。

④      免疫原性低，安全性高。

?  慢病毒滴度（TU/ml）= 細胞數(shù)×103/病毒原液體積?(μl)

?  MOI=（病毒滴度×病毒體積）/細胞數(shù)目

Multiplicity of Infection（Mol）, 感染復(fù)數(shù)，指每個細胞感染的病毒顆粒數(shù)，MOI越高，細胞越難感染。通常把某株細胞有80%被感染時的MOI值作為該株細胞的MOI。

Polybrene：帶正電的小分子，與細胞表面陰離子結(jié)合能促進慢病毒對細胞的感染效率，通常能提高2~10倍，但有一定細胞毒性，濃度需摸索，一般在1~10μg/ml范圍。

常見問題

1、在病毒感染時，不同的細胞建議先做預(yù)實驗，設(shè)置MOI梯度，選擇最適MOI進行正式實驗

2、實際操作中，感染時是否加polybrene或穩(wěn)株篩選時是否加嘌呤霉素可根據(jù)細胞狀態(tài)而定，后續(xù)調(diào)整狀態(tài)可適當提高血清濃度

3、如何測滴度？

在載體感染靶細胞之前，需要滴定產(chǎn)生的載體以調(diào)整載體的劑量。載體效價對評估轉(zhuǎn)導(dǎo)效率也很關(guān)鍵?？梢允褂貌煌姆椒ㄍ瓿傻味ǎ海?）測量載體制劑中載體顆粒組分的量（物理顆粒數(shù)量/ p24 衣殼濃度/ RT 活性/基因組拷貝數(shù)）; （2）測量感染細胞中的原病毒載體 DNA 拷貝數(shù); （3）測量細胞中表達的轉(zhuǎn)基因（通過流式細胞術(shù)或免疫染色）。